高效液相色谱浓度和峰面积成反比?
峰高指待测组分从柱后洗脱出最大浓度时检测器输出的信号值,单位一般为mAU,AU或mV,也可代表相对含量,但不如峰面积准确 峰面积指峰高与保留时间的积分值,单位一般相应为mAU*min,AU*min或mV*min,代表相对含量比较准确 峰面积比代表各物质的相对百分含量,单位一般为% 不知回答得满不满意
液相峰分叉的原因?
液相色谱仪是指利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异,对混合物进行先分离,而后分析鉴定的仪器。在液相色谱仪的使用过程中,操作人员经常会遇到色谱峰出现分叉的情况。原因是:
色谱柱污染
保护柱失效
接头连接不正确
溶剂效应
样品过载
色谱在塌陷
柱前筛板部分堵塞
色谱柱性能下降
如何把液相色谱两个峰分开?
只需要用鹏化玻璃就可以把液相色谱的两个峰分开。
液相色谱一定是将水相与有机相混合后、抽滤(使用混合型过滤膜),用一个管路(如A管)泵入仪器,这是使用的原则。切勿因节约有机相、便于摸索色谱条件等原因而使用两个管路(一个纯水相、一个纯有机相)泵入仪器,即便配制了脱气机。因此种情形极易造成水相中盐和表面活性剂的少量析出。
高效液相色谱中同一个标准品两天跑出来的峰面积相差四百左右(6500左右的峰面积),主要是什么问题?
第一,要保证一个稳定的实验条件,两天的液相、色谱柱没变。保留时间也没有太大变化。如果色谱柱不同,可能变化会很大。保留时间有变化,峰面积会有一定影响。
第二,就是你这个物质的问题。这涉及到一个溶液稳定性的问题。有些物质,连续放置一至两个星期都不会有太大的变化。但是有些物质配制24小时之内就已经超出范围了,甚至有需要现配现用的样品。这由你测定的物质和溶剂决定。所以要有溶液稳定性的考察。
你的这种情况峰面积变化了将近1%,如果不是进样误差导致,那就先排除一下实验条件的影响,然后在一天之内的几个时间点考察一下稳定性就可以了。
做液相的时候一个峰的位置出现两个尖峰是什么情况?
三个可能:
1,你的样品峰不纯,出现了杂质,或者是同分异构体。因为反相色谱的同分异构体不可能分离,所以后可能是出现叉峰的情况。这个没办法,只能改变方法,或者是异构体用手性柱分离。
2,溶剂。有时候实验员为了省事,会用有机相溶解样品。比如磷酸缓冲盐-甲醇的流动相,用甲醇溶解样品。这就出现了一个问题,溶剂,也就是样品的极性、pH值和流动相的极性和pH值有出入。这就导致一部分样品流动很快,一部分样品流动较慢,反映在液相上会出现叉峰。这个的话你先用流动相作为溶剂溶解样品试试看。如果是这个问题,进样几次峰型就会好转的。
3,色谱柱。色谱柱会越用越差的。新的色谱柱跑出来的色谱峰又高又尖,很漂亮,时间久了,色谱峰就会变矮,然后会分叉。这个表现为,每一个色谱峰都会分叉。小的杂质峰即便没有分开,峰型也会很难看。这个的解决方法要不就把色谱柱反冲,再生。要不就直接更换新的色谱柱。