哪些原因会导致液相色谱峰分离度差，峰分不开？
很多因素，如：柱效，柱子的类型、流速、压力、流动相的种类、柱温、缓冲盐和溶剂的pH等等，可以先从简单的开始逐个的排查。
高效液相色谱中同一个标准品两天跑出来的峰面积相差四百左右（6500左右的峰面积），主要是什么问题？
第一，要保证一个稳定的实验条件，两天的液相、色谱柱没变。保留时间也没有太大变化。如果色谱柱不同，可能变化会很大。保留时间有变化，峰面积会有一定影响。第二，就是你这个物质的问题。这涉及到一个溶液稳定性的问题。有些物质，连续放置一至两个星期都不会有太大的变化。但是有些物质配制24小时之内就已经超出范围了，甚至有需要现配现用的样品。这由你测定的物质和溶剂决定。所以要有溶液稳定性的考察。你的这种情况峰面积变化了将近1%，如果不是进样误差导致，那就先排除一下实验条件的影响，然后在一天之内的几个时间点考察一下稳定性就可以了。
色谱图峰谷比是什么意思？
一个色谱图波动的数据,它的某个最高点称为峰值,最低点成为谷值,用峰值除以谷值,就是色谱图峰谷比。色谱图是指被分离组分的检测信号随时间分布的图象。样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线。色谱图形状随色谱方法和检测记录的方式不同而不同，迎头色谱和顶替色谱的色谱图为一系列台阶；在洗脱法色谱中，若采用微分型检测器时，分离组分的检测信号随时间变化的图形为近似于高斯分布的一组色谱峰群，色谱图的纵坐标为检测器的响应信号，横坐标为时间、体积或距离。
高效液相色谱为什么进样量一样而峰面积不一样？
肯定不一样，因为溶液不可能达到完全均一，稳定。时间前后有些偏差时允许的，但如果是峰变形了，估计你的柱子有问题。偏差吧，时间 温度 溶剂什么的。如果是峰面积，有可能是定量泵或定量环污染有误差；如果是保留时间，环境因素变化太快所致。样品不会分布不均的，应该是仪器问题，峰面积差别大一个是进样量的问题，一个是检测器的问题。
高效液相色谱中同样的一批样出峰时间不一样是什么原因？
很多种情况都可以造成出峰时间不一致1 温度 如果没有使用柱温箱的话，环境温度对出峰时间有影响。2 柱压 压力变化造成溶质在固定相和流动相中的平衡系数变化，使保留时间的变化。检查下柱子是不是有点堵塞，流路和检测器中有没有气泡，还有就是流动相比例，机器自动配比的话检查下比例阀是不是不太精准。